Coumarin (2H-1-Benzopyran-2-one) act against planktonic and biofilm forms of Staphylococcus aureus, Klebsiellapneumoniae and Pseudomonas aeruginosa

SUMMARY Introduction: biofilm-related infections caused by Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae and Pseudomonas aeruginosa are difficult to treat and few effective pharmacological options are currently available for this purpose. In this context, coumarin (2H-1-Benzopyran-2-one) has been reported to have antibacterial and antibiofilm activity, but this potential remains poorly understood. Aim: to investigate the action of coumarin on planktonic and biofilm forms of S. aureus, K. pneumoniae and P. aeruginosa. Results: a minimum inhibitory concentration (MIC) of coumarin ranging from 256 to 1024 fig/mL was observed, with a remarkable ability to inhibit the formation of biofilms and to act on mature biofilms in concentrations close to MIC. Conclusion: coumarin has strong activity against planktonic and biofilm forms on the three species of great relevance in the clinical scenario. These results are interesting to enable a pharmacological alternative for the treatment of these infections.

Introducción: las infecciones relacionadas con la biopelícula causadas por Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae y Pseudomonas aeruginosa son difíciles de tratar y actualmente existen pocas opciones farmacológicas eficaces para este propósito. En este contexto, se ha informado que la cumarina (2H-1-Benzopiran-2-ona) tiene actividad antibacteriana y antibiofilm, pero este potencial sigue siendo poco conocido. Objetivo: investigar la acción de la cumarina sobre formas planctónicas y de biopelículas de S. aureus, K. pneumoniae y P. aeruginosa. Resultados: se observó una concentración inhibitoria mínima (CMI) de cumarina en el rango de 256 a 1024 µg/mL, con una notable capacidad para inhibir la formación de biofilms y actuar sobre biofilms maduros en concentraciones cercanas a la CMI. Conclusión: la cumarina tiene una fuerte actividad contra las formas planctónicas y biofilm sobre las tres especies de gran relevancia en el escenario clínico. Estos resultados son interesantes para habilitar una alternativa farmacológica para el tratamiento de estas infecciones.

Introdução: as infecções relacionadas ao biofilme causadas por Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae e Pseudomonas aeruginosa são difíceis de tratar e poucas opções farmacológicas eficazes estão disponíveis atualmente para esse propósito. Nesse contexto, foi relatado que a cumarina (2H-1-benzopirano-2-ona) tem atividade antibacteriana e antibiofilme, mas esse potencial permanece pouco conhecido. Objetivo: investigar a ação da cumarina sobre as formas planctónicas e de biofilme de S. aureus, K. pneumoniae e P. aeruginosa. Resultados: observou-se uma concentração inibitória mínima (CIM) de cumarina variando de 256 a 1024 µg/mL, com notável capacidade de inibir a formação de biofilmes e de atuar sobre biofilmes maduros em concentrações próximas à CIM. Conclusão: a cumarina possui forte atividade contra as formas planctónicas e de biofilme sobre as três espécies de grande relevância no cenário clínico. Esses resultados são interessantes para possibilitar uma alternativa farmacológica para o tratamento dessas infecções.

Serotonergic-like profile of 4-propyl-2hbenzo[h]-chromen-2-one (FCS-304) in mice and rats / Perfil de tipo serotoninérgico de 4-propil-2h-benzo[h]-cromen-2-ona (FCS-304) en ratones y ratas

Background: 4-propil-2H-benzo[h]-cromen-2-ona (FCS-304) is a semisynthetic coumarin with MAO-A inhibitory activity and positive results in forced swimming and tail suspension test in mice, but until now, it has not been studied in other screening antidepressant models in mice and rats. Objectives: The aim of this work was to assess the serotonin like effect of FCS-304 in the 5-hydroxytryptophan (5-HTP) test in mice, in the behavioral despair test in rats, and in the reserpine test in rats. Methods: Potentiation of 5-HTP (100 mg/kg, i.p.), induced head twitches were assessed in mice, previously treated with FCS-304 (50-75-150 mg/kg, p.o.). The behavioral despair test was performed in rats treated with FCS-304, recording the immobility time attained by the animals subjected to forced swimming. Antagonism of reserpine-induced ptosis was examined in rats, assessing the level of palpebral closure. Imipramine (30 mg/kg, p.o.) and vehicle (canola oil) served as positive and negative controls, respectively. Results: FCS-304 significantly potentiated 5-HTP induced head twitches in mice, in a dose dependent manner. In rats, FCS-304 significantly decreased the immobility time in the behavioral despair test and antagonized reserpine induced ptosis. Conclusions: These results add support to propose that FCS-304 could elicit antidepressant effects related to MAO-A inhibitory activity.

Antecedentes: 4-propil-2H-benzo[h]-cromen-2-ona (FCS-304) es una cumarina semisintética inhibidora de MAO-A con efectos positivos en las pruebas de nado forzado y suspensión por la cola en ratones, sin embargo, hasta ahora no se había estudiado en otros modelos de tamizado antidepresivo en ratones y ratas. Objetivos: el objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de tipo serotoninérgico de FCS-304 en la prueba de potenciación de 5-hidroxitriptofano (5-HTP) en ratones, y su respuesta en la prueba de desesperanza conductual en ratas y en la prueba de reserpina en ratas. Métodos: se evaluó la potenciación de las sacudidas de cabeza inducidas por 5-HTP (100 mg/kg, i.p.), en ratones tratados con FCS-304 (50-75-150 mg/Kg, v.o.). La prueba de desesperanza conductual se realizó en ratas tratadas con FCS-304, expuestas a nado forzado. El antagonismo de la ptosis palpebral inducida por reserpina se examinó en ratas determinando el grado de apertura ocular. Imipramina (30 mg/kg, v.o.) y el vehículo (aceite de canola, 0,1 mL/10 g), sirvieron como controles positivo y negativo, respectivamente. Resultados: FCS-304 incrementó significativamente el recuento de sacudidas de cabeza inducidas por 5-HTP en ratones, en función de la dosis. En ratas, FCS-304 fue efectiva para disminuir el tiempo de inmovilidad en la prueba de desesperanza inducida por nado forzado y el grado de ptosis palpebral inducido por reserpina. Conclusiones: estos resultados dan soporte para proponer que FCS-304 ejercería efectos de tipo antidepresivo relacionados con la inhibición de MAO-A.

Synthesis, characterization and in vitro antimicrobial screening studies of some pyridyl-coumarin compounds / Síntesis, caracterización y evaluación antimicrobiana in vitro de algunos derivados de piridil-coumarina

SUMMARY In vitro antimicrobial screening of some pyridyl-coumarin compounds were done against some bacterial and fungal strains in DMF and DMSO. These pyridyl-coumarin compounds were synthesized in the laboratory and their structure was confirmed by different spectroscopic techniques such as IR, 1H NMR, 13C NMR and mass. Some of these compounds exhibited excellent antibacterial activity in both the solvents.

RESUMEN La actividad antimicrobiana in vitro de algunos compuestos derivados de piridil-coumarina se evaluó frente a algunas cepas bacterianas y fúngicas en DMF y DMSO. Las piridil-cumarinas se sintetizaron en el laboratorio y sus estructuras se confirmaron por diferentes técnicas espectroscópicas, tales como IR, 1H NMR, 13C NMR y masas. Algunos de los compuestos que se obtuvieron presentaron buena actividad antibacteriana en ambos solventes.

Influencia del tiempo de cosecha sobre el contenido de cumarina y de umbeliferon hallado en los extractos de Justicia pectoralis Jacq. (tilo) / Harvest time influences on coumarin and umbelliferone contents in extracts of Justicia pectoralis Jacq. (tilo)

INTRODUCTION: Justicia pectoralis Jacq. (Acanthaceae) is medicinal plant species commonly used in Cuba for the treatment of nervous disorders because of its sedative effect. Coumarin is one of its main active phytochemicals present in the extracts obtained from this plant and used as analytic marker in quality control. On the other hand, this compound contributes to the sedative effect attributed to this plant. OBJECTIVE: to evaluate the influence of harvest time on the coumarin and umbelliferone (7-hydroxycoumarin) in Justicia pectoralis extracts. METHODS: the experiment lasted two years. The harvest was performed at 4, 6 and 8 months after planting. Aqueous and hydroalcohol extracts were produced and the coumarin and umbelliferone contents were determined by high resolution liquid chromatography. RESULTS: the achieved results showed the presence of coumarin and umbelliferone in both extracts. Both methods can be used for the extraction of these components from the plant, although in the case of umbelliferone, the best extraction results were achieved by using aqueous extract. In both cases, the recovery percentages were more than 98 percent. This study confirmed that the harvest time significantly influences on the coumarin and umbelliferone contents. CONCLUSIONS: the best results are observed in the first two harvests (4 and 6 months at summer time), which indicates that the industry should process the vegetal material in these two periods of the year(AU)

INTRODUCCIÓN: Justicia pectoralis Jacq. (Acanthaceae) es una planta medicinal comúnmente usada en Cuba para el tratamiento de enfermedades nerviosas por su efecto sedante. La cumarina es uno de los fitocomponentes mayoritarios en los extractos obtenidos con esta planta y empleado como marcador analítico en los controles de calidad. Por otro lado, este componente contribuye con el efecto sedante atribuido a esta planta. OBJETIVO: evaluar la influencia del tiempo de cosecha sobre el contenido de cumarina y umbelliferona (7 hidroxicumarina) en extractos de Justicia pectoralis. MÉTODOS: se desarrolló el experimento durante 2 años. Se realizaron las cosechas a los 4, 6 y 8 meses de plantada. Se elaboraron extractos acuosos e hidroalcohólicos y se determinó el contenido de cumarina y umbelliferone por cromatografía líquida de alta resolución. RESULTADOS: se mostró la presencia de cumarina y umbelliferona en ambos extractos. Además, en el caso de la umbelliferona, los mejores resultados se alcanzaron al aplicar extracción acuosa. En ambos casos, los por cientos de recobrados fueron superiores al 98 por ciento. Se confirmó que el tiempo de cosecha influyó significativamente sobre el contenido de cumarina y umbelliferona. CONCLUSIONES: los mejores resultados se obtienen en la primeras dos cosechas (4 y 6 meses que coincide con el verano), lo que sugiere que el material de la planta debe procesarse por la industria en esos periodos del año(AU)

Obtención de extractos secos a partir de extractos acuosos de Justicia pectoralis (tilo) / Obtention of dry extract from aqueous extracts of Justicia pectoralis Jacq (tilo)

Introducción: Justicia pectoralis Jacq. (Acanthaceae) es una especie medicinal nativa de la América tropical. En Cuba es usada en la medicina tradicional en el tratamiento de afecciones nerviosas. La industria farmacéutica cubana trabaja en el desarrollo de procesos tecnológicos para la obtención de materias primas de calidad farmacéutica a partir de productos naturales. Objetivo: desarrollar un proceso tecnológico para la obtención de extractos secos a partir de extractos acuosos de Justicia pectoralis. Métodos: se desarrolló un proceso para la obtención de extracto seco por spray drying a partir de extracto acuoso de Justicia pectoralis. La influencia que sobre el contenido de cumarina tenían la relación sólido-líquido y el tiempo de extracción fue estudiada aplicando un diseño superficie respuesta. Se estudió el proceso de secado y la posterior evaluación farmacológica del polvo seco. Resultados: estos mostraron que la relación sólido-líquido tenía una fuerte influencia estadísticamente significativa sobre la extracción de la cumarina en las condiciones de trabajo experimentadas. El tiempo de extracción y la interacción entre ambos factores no fueron significativos para el modelo de regresión estudiado. Por otro lado, la evaluación de la influencia de aditivos inertes en el proceso de secado mostró que los mejores rendimientos se alcanzaban cuando se empleaba almidón soluble 30 por ciento, y no se afectaba la actividad sedante del producto. Conclusiones: una relación sólido-líquido de 1:20 y un tiempo de extracción de 15 min resultaron las condiciones óptimas para la extracción de cumarina

Introduction: Justicia pectoralis Jacq. (Acanthaceae), is a medicinal species native to the American tropics. In Cuba it is used in folk medicine in the treatment of nervous disorders. The Cuban Pharmaceutical Industry is working on the development of technological processes for the obtention of pharmaceutical quality raw materials from natural products.Objectives: develop a technological process to obtain dry extract from aqueous extracts of J. pectoralis.Methods: a process to obtain dry extract by spray drying from aqueous extract of J. pectoralis was developed. The influence of solid-liquid r ratio and extraction time on coumarin content was evaluated by applying a response surface methodology (RSM). The drying process and later pharmacological evaluation of the dry powder were studied. Results: results show that solid-liquid ratio was the statistically significant main effect, having a strong positive influence on coumarin extraction in our working conditions. Extraction time and interaction between both factors were not significant for regression models. On the other hand, evaluation of the influence of inert additives on drying s showed that the best results were obtained with the use of 30 percent soluble starch, which did not affect sedative activity. Conclusions: a solid-liquid ratio of 1:20 and an extraction time of 15 minutes were suggested as optimum parameters for coumarin extraction

Ensayo de disolución para las tabletas de Tilo ® elaboradas con extracto seco de Justicia pectoralis Jacq / Dissolution Assay for Tilo ® tablets prepared with dry extract of Justicia pectoralis Jacq

Introducción: el ensayo de disolución es una técnica analítica de empleo común en un laboratorio farmacéutico. Un proceso tecnológico para la elaboración de tabletas fue desarrollado. El ingrediente farmacéutico activo usado fue Tilo ® extracto seco. Objetivo: el objetivo de este trabajo fue desarrollar y validar un ensayo de disolución para evaluar la estabilidad y la calidad de dicho producto. Método: se utilizaron muestras de un lote experimental, un lote placebo y lotes pilotos de tabletas de Tilo ® de 100 mg. Se evaluaron como medios de disolución agua destilada y solución de ácido clorhídrico 0,1 mol/L, realizándose perfiles de disolución a 50, 75 y 100 rpm, empleándose los dos tipos de aparatos establecidos en la literatura para este ensayo (cesta y paleta). El contenido de cumarina fue analizado por HPLC. El ensayo fue validado según la USP. Resultados: los resultados mostraron que el agua destilada fue un medio de disolución adecuado, alcanzándose porcientos de disolución de la droga por encima del 85 por ciento a los 30 minutos, no existiendo diferencias significativas entre los tipos de aparatos recomendados por la USP. Mientras que, los perfiles de disolución a diferentes tiempos y velocidades de agitación mostraron una liberación gradual del principio activo en el tiempo, donde a medida que se incrementa la velocidad de agitación, se incrementa el porcentaje de disolución de la droga en el medio. La validación del ensayo demostró que el mismo era específico y preciso. Conclusiones: se estableció como ensayo de disolución las siguientes condiciones de trabajo: Aparato: paleta, 100 rpm; medio: agua destilada, 500 mL; tiempo: 60 minutos y Temperatura: 37 ± 0,5 ºC

Introduction: dissolution testing is one of the most common analytical techniques performed in a pharmaceutical analytical laboratory. A technological process for the production of tablets was developed. The active pharmaceutical ingredient used was Tilo ® dry extract. Objective: to develop and to validate the dissolution assay aimed at evaluating the stability study and the quality of this product. Methods: some samples from the experimental batch, the placebo batch and the pilot batches were used in this study. Distilled water and 0,1 mol/L chlorhidric acid were evaluated as dissolution media. The dissolution profiles at 50, 75 and 100 rpm and two types of dissolution devices (basket and paddle) recommended for the USP were evaluated. Coumarin content was analyzed by HPLC method. The dissolution assay was validated according to the United States Pharmacopeia. Results: the results showed that the distilled water was an appropriate dissolution medium, where percentages of released drug higher to 85 percent in 30 minutes were obtained; there were no significant differences among the types of dissolution devices recommended by the USP. The dissolution profiles at different shaking times and speeds showed gradual release of the active principle. As the shaking speed increases, the percentage of the drug dissolution increases in the medium. The assay was considered specific and precise. Conclusions: a type II (paddle) dissolution device, 500 ml of distilled water at 37 ± 0,5 ºC and 100 rpm, were established as parameters of the dissolution assay

Efeito de dinamizações de Arnica montana L. no metabolismo de chambá (Justicia pectoralis Jacq. ) / Effect of dynamizations of Arnica montana in metabolism of chambá (Justicia pectoralis Jacq. )

Este estudo objetivou avaliar a resposta do crescimento e do metabolismo secundário de Justicia pectoralis, expresso em produção de cumarina, a crescentes dinamizações de A. montana. O experimento foi conduzido na Universidade Federal de Viçosa. O delineamento estatístico foi inteiramente casualizado, com seis repetições e cinco tratamentos, totalizando 30 parcelas experimentais, sendo cada parcela constituída de uma planta por vaso. Os tratamentos foram as dinamizações 3CH, 30CH, 60CH, 100CH e 200CH do preparado homeopático A. montana. Os tratamentos foram aplicados às plantas via pulverização, em intervalos semanais, iniciando logo após o plantio. Após quatro meses do plantio as plantas foram colhidas. As características de crescimento avaliadas foram matérias fresca e seca de folhas e caules, matérias fresca e seca de inflorescências e matérias fresca e seca total. No estudo fitoquímico foi avaliada a produção da cumarina (1-2 benzopirona). Não houve resposta nas variáveis de crescimento aos tratamentos. As dinamizações de A. montana causaram alterações no metabolismo secundário das plantas. Os conteúdos de cumarina das plantas com A. montana 3CH e 30CH foram próximos e mais baixos, aumentando progressivamente a partir de 60CH, chegando ao máximo em 100CH, seguido de redução em 200CH. A preparação homeopática A. montana causa alterações no metabolismo secundário de chambá, sendo as repostas dependentes da dinamização.

Were evaluated the responses to dynamizations of Arnica montana in the growth and in the secondary metabolism of Justicia pectoralis expressed as coumarin production. The studies were carried out at the Universidade Federal de Viçosa. The statistical design was completely randomized, with six replicates and five treatments, 30 experimental plots, one plant per pot. The treatments were dynamizations 3CH, 30CH, 60CH, 100CH and 200CH homeopathic preparation of A. montana. The application the treatments begun are planting seedlings, the aerial part being sprayed, at weekly intervals. After four months of planting, the plants were harvested. The evaluated growth characteristics were: fresh and dry matter of leaves and stems, fresh and dry matter of inflorecenses, and fresh and dry matter total. In the phytochemistry study, the production of the coumarin 1,2-benzopyrone was evaluated. Were no responses of growth characteristics. The dynamizations of A. montana caused changes in secondary metabolism of plants. The coumarin production with A. montana plants 3CH and 30CH were lower, increasing progressively from 60CH, and coming to increased in 100CH, followed by a large reduction in the 200CH. The homeopathic preparation A. montana cause change in secondary metabolism of chambá, and the responses depend on dynamizations.

Justicia pectoralis Jacq: , Acanthaceae: preparation and characterisation of the plant drug including chromatographic analysis by HPLC-PDA

Justicia pectoralis Jacq., Acanthaceae, é uma erva conhecida popularmente no Nordeste como chambá e, utilizada tradicionalmente no tratamento de doenças do trato respiratório, como a asma, tosse e bronquite. Essa espécie encontra-se na Relação Nacional de Plantas Medicinais de Interesse para o SUS. O objetivo do presente estudo foi elaborar protocolo para a preparação da droga vegetal a partir de J. pectoralis e realizar a sua caracterização visando seu emprego como matéria-prima farmacêutica. A parte aérea de J. pectoralis, após secagem em estufa com circulação e renovação de ar (35 °C) durante diferentes períodos de tempo (1-5 dias) mostrou a partir de 24 h de secagem um teor de umidade abaixo do valor máximo permitido para drogas vegetais. O pó da droga vegetal foi classificado como pó moderadamente grosso e, caracterizado quanto aos teores de cinzas totais, extrativos solúveis em água e etanol. Análise do extrato hidroalcoólico (etanol 20 por cento) de J. pectoralis por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE-DAD) determinou um teor de cumarina e umbeliferona de 16,2 e 0,81 mg/g da droga vegetal, respectivamente. As condições de preparação da droga vegetal e os parâmetros de controle de qualidade determinados para J. pectoralis no presente estudo são de interesse no desenvolvimento de fitoterápicos que empreguem esse matéria-prima ativa.

Justicia pectoralis Jacq., Acanthaceae, is a herb popularly known in Brazilian northeast as "chambá" and used in folk medicine for the treatment of respiratory tract conditions such as asthma, cough and bronchitis. This species is included in the National Register of Plants of Interest to the National Health System. The aim of the present study was to develop a protocol for the preparation of the plant drug from J. pectoralis and to characterise the plant drug for its use as a pharmaceutical raw material. The aerial parts of J. pectoralis, after drying chamber with forced air circulation (35 °C) for different periods of time (1-5 days), presented after one day a moisture content below the maximum allowed for plant drugs. The powder of the plant drug was classified as moderately coarse, and the total ashes content and the water- or ethanol-soluble extractives were determined. Analysis of hydroalcoholic (ethanol 20 percent) extract of J. pectoralis by high performance liquid chromatography-photo diode array (HPLC-PDA) determined the content of coumarin and umbelliferone (16.2 and 0.81 mg/g plant drug, respectively). The preparation conditions of the plant drug and the quality control parameters established for J. pectoralis in this study are of interest for the development of phytomedicines which use this active raw material.

Avaliação da qualidade de amostras comerciais de folhas e tinturas de guaco / Evaluation of the quality of commercial samples of leaves and tinctures of guaco

O mercado brasileiro de fitoterápicos encontra-se em crescente expansão, porém a falta de padronização e a má qualidade da matéria-prima vegetal constituem um problema crucial na produção de fitoterápicos de qualidade. Neste trabalho, foram avaliadas drogas vegetais constituídas de folhas (amostras A, B, C) e tinturas (amostras D, E, F) de guaco, adquiridas no Mercado Central e em farmácias de manipulação de Belo Horizonte, respectivamente. Realizaram-se testes físicoquímicos de caracterização organoléptica, determinação de matéria estranha, teores de água e cinzas totais para as amostras de drogas vegetais e caracterização organoléptica, medidas de pH e de densidade para as amostras de tinturas. Foram obtidos os perfis cromatográficos por CCD e CLAE-FR e fez-se a quantificação da cumarina (marcador químico), por CLAE-FR. As amostras analisadas apresentaram um ou mais dos parâmetros avaliados fora dos valores preconizados pela farmacopéia brasileira, evidenciando-se a necessidade da realização do controle de qualidade de matérias-primas vegetais, para se obter medicamentos fitoterápicos de qualidade, eficientes e seguros.

The Brazilian market of herbal medicine is in increasing expansion; however, the lack of standardization and the bad quality of the plant raw materials constitute a crucial problem for the production of quality herbal medicines. In this work, herbal drugs consisting of leaves (samples A, B, C) and tinctures (samples D, E, F) of guaco purchased in the Central Market and from pharmacies in Belo Horizonte, respectively, were evaluated. Physical-chemical tests such as organoleptic characterization, determination of foreign matter, total ash and water content were performed on the samples of herbal drugs. The organoleptic characterization, measures of pH and density of the tincture samples were also determined. TLC and RP-HPLC profiles of the herbal drugs and tinctures were obtained and the quantification of coumarin (used as a marker compound) by RP HPLC was determined. The analyzed samples showed one or more of the evaluated parameters outside of the values recognized by the Brazilian Pharmacopoeia. This demonstrates the need for the quality control of the plant raw materials, in order to guarantee quality and safety in herbal medicine.

Determinação do teor de cumarina no xarope de guaco armazenado em diferentes temperaturas / Coumarin content of guaco syrup stored at different temperatures

A produção magistral do xarope de guaco, obtido a partir do extrato fluido do guaco (Mikania glomerata Spreng., Asteraceae) e comercializada na Farmácia Universitária da UFJF/MG, gerou um projeto de pesquisa com o objetivo principal de estudar a estabilidade do produto acabado, tendo como ponto de referência a determinação do teor de cumarina das amostras armazenadas em diferentes temperaturas. O método aplicado para realizar a análise do teor de cumarina presente no xarope em estudo foi espectrometria no UV com comprimento de onda de 275,4 nm. Utilizou-se como veículo para efetuar as diluições da amostra uma mistura de metanol/água destilada, na proporção de 80 por cento v/v. A curva de calibração foi obtida diluindo-se 100 mg de cumarina padrão em 100 mL da solução descrito acima, obtendo-se sete concentrações distintas com variação de 2 µg a 20 µg. Os resultados obtidos demonstraram que a temperatura de armazenamento de 45 °C foi considerada ótima para desenvolver a conversão do isômero trans em cis com subseqüente conversão deste a cumarina. Os valores de cumarina encontrados na forma farmacêutica em estudo foram de 1,19 a 1,37 mg/mL, sendo que o valor mais alto refere-se às amostras armazenadas a 45°C durante seis meses.

The production of guaco syrup, obtained from guaco (Mikania glomerata Spreng., Asteraceae) fluid extract, and commercialized by the University Pharmacy of the Federal University of Juiz de Fora-MG, Brazil, led to a research project whose main aim was to study the stability of the finished product, with reference to the coumarin content of samples stored at different temperatures. UV spectrophotometry (275.4 nm) was used to assess the coumarin content of the study syrup. An 80 percent v/v methanol/distilled water mixture was used for sample dilution. The calibration curve was constructed by the dilution of 100 mg standard coumarin in 100 ml of the aforementioned solution, with seven distinct concentrations (ranging from 2 µg a 20 µg) being obtained. The results showed the 45 °C storage temperature to be optimum for the development of trans-cis isomerization, with subsequent conversion of the latter into coumarin. Coumarin content in the studied pharmaceutical presentation ranged from 1.19 to 1.37 mg/mL, the highest value corresponding to the samples stored at 45 °C for six months.

Estudo comparativo da composição química das espécies vegetais Mikania glomerata Sprengel e Mikania laevigata Schultz Bip. ex Baker / Comparative study of the chemical composition of the species Mikania glomerata Sprengel and Mikania laevigata Schultz Bip. ex Baker

Adulterações da matéria-prima vegetal ocorrem comumente no mercado de fitoterápicos, sob a forma de substituições e/ou falsificações. Muitas vezes, espécies distintas são comercializadas em substituição à farmacopéica devido à dificuldade de obtenção desta, ou mesmo pelo emprego intencional de espécies de menor valor econômico que apresentem características morfológicas semelhantes. Portanto, faz-se necessária a realização de estudos que busquem identificar a constituição química das espécies de amplo uso medicinal, que são alvos de adulterações. Mikania glomerata e Mikania laevigata, conhecidas popularmente como "guaco", são comercializadas indistintamente. Buscando-se avaliar a composição química das duas espécies, realizou-se uma prospecção fitoquímica por CCD e foram obtidos os perfis cromatográficos por CLAE-FR. Fez-se a quantificação da cumarina empregando-se o mesmo método. Na prospecção fitoquímica por CCD, foi detectada, nas duas espécies, a presença de cumarina, triterpenos/esteróides e heterosídeos flavônicos. Os perfis cromatográficos, obtidos por CLAE-FR, mostraram-se semelhantes, observando-se a predominância de compostos polares. Na quantificação da cumarina, obtêve-se um teor de 0,30 por cento para M. glomerata e 0,43 por cento para M. laevigata, teores de acordo com o preconizado na monografia do guaco-cheiroso (mín. 0,1 por cento). M glomerata e M. laevigata apresentaram composição química semelhante e teores de cumarina próximos, sugerindo que estas podem ser utilizadas de forma indistinta.

Adulterations of plant raw materials often occur in the marketing of herbal medicine, usually in the form of substitutions and/ or fakes. Many times, different plant species are commercialized in the place of the one recognized by the pharmacopoeia. This may occur due to the difficulties of obtaining the authentic plant material, or by an intentional use of a plant species that has less economic value but shows similar morphologic features. Therefore, it is necessary to carry out studies that can identify the chemical composition of those species of wide medicinal use, which are the targets of adulterations. Mikania glomerata and Mikania laevigata, popularly known as "guaco", are indistinctly commercialized in Brazil. A phytochemical screening by TLC was carried out to evaluate the chemical composition of both species. The RP-HPLC profiles were obtained and the quantification of coumarin was determined by the same method. A phytochemical screening has shown that coumarin, triterpenes/ steroids and flavonic heterosides are the constituents detected in both species. The RP-HPLC profiles were similar between the two species and revealed the predominance of polar compounds. In the quantification of coumarin, a content of 0.30 percent (w/w) was obtained for M. glomerata and 0.43 percent (w/w) for M. laevigata. These values are in accord with the contents (min. 0.1 percent, w/w) described by the monograph of "guaco-cheiroso" in the Brazilian Pharmacopoeia. Therefore, the results indicated similar chemical profiles for M. glomerata and M. laevigata, as well as comparable coumarin contents, thus suggesting that the species might be used indistinctly.

A validated capillary gas chromatography method for guaco (Mikania glomerata S) quality control and rastreability: from plant biomass to phytomedicines / Método validado por cromatografia gasosa capilar para o controle de qualidade e rastreabilidade de guaco (Mikania glomerata S): da matéria-prima ao fitoterápico

Este trabalho descreve a validação completa de metodologia analítica empregando cromatografia gasosa capilar com padronização interna para quantificação da cumarina (1,2-benzopirona) em produtos contendo guaco (Mikania glomerata Spreng - Asteraceae): xarope, planta e extrato padronizado, além do estudo de estabilidade do fitoterápico em questão. Utilizou-se uma coluna capilar HP-5 (30 m x 0,32 mm x 0,25 µm), hidrogênio a 1,8 mL/min e rampa de temperatura de 100 ºC a 250 ºC, a 15 ºC/min. A temperatura do injetor (split 1:20) foi de 250 ºC, enquanto a do detector foi de 270 ºC. Os tempos de retenção dos padrões foram: 2,86 minutos para o 1, 2, 3, 4-tetrametilbenzeno, 4,45 minutos para o piperonal (padrões internos) e 5,36 minutos para a cumarina. Após o procedimento de extração da planta in natura, a recuperação da cumarina foi de 101,6 por cento, enquanto que para o xarope esta foi de 100,8 por cento. Os limites de detecção e quantificação foram 0,5 µg/mL e 1,5 µg/mL, respectivamente. A precisão, determinada para todas as amostras, apresentou desvios padrões relativos menores que 2,5 por cento. Os teores de cumarina presentes nas folhas, extrato e xarope foram de 0,38 por cento m/m, 1,33 mg/mL e 0,143 mg/mL, respectivamente.

This work describes a full validation of a capillary gas chromatography analytical methodology using internal standardization for the quantification of coumarin (1,2-benzopyrone) in guaco (Mikania glomerata Spreng - Asteraceae) products: syrup, plant and its extract, including the stability study of the phytomedicine. For the analysis, it was used an HP-5 capillary column (30 m x 0.32 mm x 0.25 µm), hydrogen at a flow rate of 1.8 mL/min and the increasing temperature gradient was: 100 ºC to 250 ºC, 15 ºC/min. The temperature of injector (split 1:20) and detector were kept at 250 ºC and 270 ºC, respectively. The retention times of the standards for the above conditions were 2.86 minutes for 1, 2, 3, 4-tetramethylbenzene, 4.45 min for piperonal (internal standards), and 5.36 minutes for coumarin. After extraction procedure, the recovery of coumarin determined for plant raw material was 101.6 percent, while for syrup it was 100.8 percent. Detection and quantification limits were 0.5 µg/mL and 1.5 µg/mL, respectively. Precision was determined for all samples and the results were lower than 2.5 percent. The total amount of coumarin in plant raw material, its extract and syrup were 0.38 percent w/w, 1.33 mg/mL and 0.143 mg/mL, respectively.

Método espectroscópico para determinação de cumarina em xarope de Mikania glomerata Sprengel / Ultraviolet spectroscopy method for coumarin quantification in Mikania glomerata Sprengel syrup

Este trabalho teve como objetivo desenvolver uma metodologia analítica por espectroscopia UV, para doseamento de cumarina em xaropes de Mikania glomerata. A técnica foi baseada na extração da cumarina utilizando solventes como o clorofórmio e hexano. Após a seleção do solvente, o comprimento de onda foi definido através da sobreposição dos espectros da cumarina, metil parabeno, diluição do xarope e solução extrativa do xarope. Foram preparadas curvas analíticas de cinco soluções de cumarina com concentração variando de 0,002 a 0,03 mg/mL. Para análise da exatidão do método, foram preparados três lotes de xarope de Mikania glomerata Sprengel e o teor de cumarina determinado pela técnica espectrofotométrica foi comparado a técnica por cromatografia líquida de alta eficiência. O solvente selecionado para extração foi o clorofórmio, o comprimento de onda 320 nm. A curva analítica apresentou R² de 0,99978, demonstrando linearidade. A comparação estatística do doseamento da cumarina pela técnica espectrofotométrica estudada com a técnica cromatográfica desenvolvida por Celeghini et al. (2001) demonstrou não existir diferenças significativas, indicativo de exatidão da técnica.

A spectrophotometric procedure for coumarin determination in Mikania glomerata Sprengel (guaco) syrup is described in this work. Due to the high number of constituents in guaco syrups, the coumarin was extracted with apolar extractors (chloroform and hexane), in which chloroform was selected, because of its higher capacity of extraction. After the solvent choice, the wavelength at 320 nm, region where there is the lower interference of syrup constituents, was selected. The calibration curve showed linearity, R² of 0.99978. The spectrophotometric assay of coumarin in three samples of Mikania glomerata Sprengel syrup showed accuracy compared with the HPLC method. The results presented suggest that the spectrophotometric method may be useful for the quantitative analysis of coumarin in Mikania glomerata Sprengel syrup.

Método para la cuantificación de cumarina en extracto seco a partir de extractos de Justicia pectoralis Jacq / Method for coumarin quantification in dry extracts from Justicia pectoralis Jacq

Fundamentos: Justicia pectoralis Jacq., especie de la familia Acantaceae, es una planta herbácea que se emplea como sedante tradicionalmente por la población cubana. Objetivos: desarrollar y validar un método de análisis por cromatografía líquida de alta resolución para la determinación de cumarina en el extracto seco obtenido a partir de extractos de J. pectoralis. Métodos: se desarrolla y valida un método de análisis por cromatografía líquida de alta resolución para la determinación de cumarina. Resultados: el método desarrollado es específico, preciso, exacto y lineal. Conclusiones: el método puede ser empleado para cuantificar cumarina, en muestras de polvo seco obtenidas mediante secado por aspersión a partir de extractos de J. pectoralis.

Rationale: Justicia pectoralis Jacq., an Acantaceae family species, is an herbaceous plant that is used as a traditional sedative by the Cuban population. Objectives: to develop and to validate a high performance liquid chromatography to determine coumarin in dry extract from J. pectoralis extracts. Methods: A high performance liquid chromatography method to determine coumarin was developed and validated. Results: The method was specific, accurate, precise and linear. Conclusions: This method may be used to quantify coumarin in dry power samples obtained through spraying drying from J. pectoralis extracts.

Coumarins from the aerial parts of Prangos uloptera (Apiaceae) / Cumarinas das partes aéreas de Prangos uloptera (Apiaceae)

Phytochemical studies on the aerial parts of Prangos uloptera, an endemic Iranian species of the genus Prangos, yielded five coumarins, xanthotoxin (1), prangenin (2), scopoletin (3), deltoin (4) and prangolarin (5). The structures of these coumarins were elucidated by spectroscopic means, and the antioxidant potential of 1-5 was evaluated by the DPPH assay. The chemotaxonomic significance of 1-5 is also discussed.

Os estudos fitoquímicos das partes aéreas de Prangos uloptera, uma espécie do gênero Prangos endêmica do Irã, forneceram cinco cumarinas, xantotoxina (1), prangenina (2), escopoletina (3), deltoína (4) e prangolarina (5). As estruturas destas cumarinas foram elucidas através de métodos espectroscópicos e o potencial antioxidante de 1-5 foi avaliado pelo ensaio de DPPH. O significado quimiotaxonômico de 1-5 também é discutido.

METABOLITOS AISLADOS DE Zanthoxylum rhoifolium / ISOLATED METABOLITES FROM Zanthoxylum rhoifolium / METABOLITOS ISOLADOS DE Zanthoxylum rhoifolium

Una nueva cumarina llamada 3 -metoxi-4-(3-me t i l b u t -2-enil)-2H-cromen-2-ona fue aislada de la madera de Z. rhoifolium, junto con los compuestos conocidos, dictamnina y N-metilflindersina. Sus estructuras fueron elucidadas por RMN, incluyendo técnicas bidimensionales y por comparación con datos reportados en la literatura.

A novel coumarin named 3-metoxi-4-(3-me tilbut-2-enil)-2H-cromen-2-one was isolated from the wood of Z. rhoifolium, to get her with the known compounds, dictamnine and N-methylflin dersine. Their structures were elucidated by RMN spectraincluding 2D techniques and comparison with literature data.

Da madeira de Zanthoxylum rhoifolium foi iso la da uma nova cu ma ri na, com o name, 3 metoxi-4- (3-metilbut-2-enil)-2H-cromen 2-ona junto con os compostos, conhecidos: dictamnina y N-methyl- flindersina. Suas estruturas foram elucidadas por RMN, incluindo técnicas bidiomensionais e pela comparação comdados da literatura.

Constituintes das sementes de Copaifera officinalis L / Constituents from Copaifera officinalis L. seeds

O gênero Copaifera L. é um dos mais importantes economicamente na Região Amazônica devido, principalmente, à produção dos óleos de copaíba, oléo-resinas com diversas propriedades farmacológicas confirmadas. Apesar disso, os estudos fitoquímicos com as sementes das árvores do gênero Copaifera L.são raros. Copaifera officinalis foi a primeira espécie do gênero Copaifera a ser descrita. Este trabalho descreve a composição dos extratos obtidos em hexano e em acetato de etila das sementes de C. officinalis. No extrato obtido em hexano, a análise por cromatografia em fase gasosa utilizando padrões e através de espectrometria de massas permitiu a identificação de: esqualeno, tetradecano, hexadecano, campesterol, estigmasterol e beta-sitosterol; os ácidos graxos hexadecanóico, 9-octadecenóico e octadecanóico (majoritários); e decanóico, eicosanóico, docosanóico e tetracosanóico (minoritários). Cumarina foi isolada do extrato em acetato de etila e identificada por técnicas de RMN.

Copaifera L. is one of the most economically important plant genera in the Amazon Region, since it exudes a resin-oil named copaiba oil possessing several confirmed pharmacological properties. In spite of that, phytochemical studies of the seeds from this genus are rare. Copaifera officinalis L. was the first species in the genus Copaifera to be described. This paper describes the chemical composition of the hexane and ethyl acetate extracts of the seeds from this species. In the hexane extract, gas chromatography and mass spectrometry analyses enabled us to identify squalene, tetradecane, hexadecane, campesterol, stigmasterol and beta-sitosterol; hexadecanoic, 9-octadecenoic and octadecanoic acids (major substances); as well as decanoic, eicosanoic, docosanoic and tetracosanoic (minor substances) acids. Coumarin was detected in the ethyl acetate extract, isolated and identified by NMR.

Artefatos cumarínicos isolados de Polygala paniculata L. (Polygalaceae) / Coumarinic artifacts isolated from Polygala paniculata L. (Polygalaceae)

A partir do fracionamento em coluna de gel de sílica do extrato clorofórmico de Polygala paniculata (Polygalaceae), foram isolados 7-metóxi-8-(1',2'-epóxi-3'-metil-3'-butenil)-cumarina (1) e dois artefatos cumarínicos (2a-2b), formados a partir da abertura do anel epóxido de 1 durante o processo de isolamento. O tratamento de 1 com EtOH/SiO2, sob agitação e à temperatura ambiente durante 24 horas, resultou na formação dos respectivos artefatos: 7-metóxi-8-(1'-hidróxi-2-etóxi-3'-metil-3'-butenil)-cumarina (2a) e 7-metóxi-8-(1'-etóxi-2-hidróxi-3'-metil-3'-butenil)-cumarina (2b). As estruturas químicas desses compostos foram determinadas através da análise de seus dados espectrais, incluindo RMN bidimensional.

Fractionation of a chloroform extract of Polygala paniculata (Polygalaceae) on silica gel column chromatography yielded 7-methoxy-8-(1',2'-epoxy-3'-methyl-3'-butenyl)-coumarin (1) and two coumarinic artifacts (2a-2b). The reaction of 1 with EtOH/SiO2 at room temperature for 24 hours yielded 7-methoxy-8-(1'-hydroxy-2'-ethoxy-3'-methyl-3'-butenyl)-coumarin (2a) and 7-methoxy-8-(1'-ethoxy-2'-hydroxy-3'-methyl-3'-butenyl)-coumarin (2b). The structures have been determined by spectral data, including 2D NMR experiments.